1.0使用说明

步骤1.样品制备

将25mL (g)样品放入225mL无菌生理盐水中，配制成1:10的溶液，用无菌移液管吸1mL(1:10)溶液放入9mL无菌生理盐水中，配制1:100的溶液，准备稀释十倍的样品。如有必要，可使用1摩尔/升氢氧化钠（mol/L NaOH）或1摩尔/升盐酸（mol/L HCL）调节pH值至6.6-7.2。

步骤2接种

对于普通食品选择2 - 3倍稀释的溶液，对于细菌较少的液体，直接吸取原样品进行检测。将菌落测试卡置于无菌实验台上，揭开表面的薄膜，用无菌移液管吸1mL溶液，然后缓慢均匀地滴在测试卡上。然后轻轻盖上薄膜，静置约10秒直到介质凝固。为每个稀释溶液接种两个测试卡，为每个测试卡设置空白对照组。

步骤3培养

将测试卡叠放在一起，放回自封袋，透明的一面朝上，密封好，然后将其放入培养箱中。叠合测试卡的数量不应超过12个。对于普通食品，培养温度为36±1℃，培养时间为15~24小时。对于水产类食品，培养温度为30±1℃，培养时间为48小时。

2.0结果

细菌显示测试卡上有红点，选择菌落数量在30CFU - 300CFU之间的测试卡进行计数。

3.0计算方法及报告

3.1如果只有一个稀释后的样品适合计数，则计算这些测试卡上的菌落平均数量，再乘以相应的稀释倍数，得到报告估计的CFU/mL或CFU/g。

3.2如果两个连续稀释的测试卡菌落数均在30CFU - 300CFU之间，则按下式计算菌落数的平均值:

        ∑C

N= ———————

     (n1+0.1n2) d

式中N为样本细菌数。

∑C表示这两种连续稀释的细菌总数。

n1为两个连续稀释倍数较低的测试卡数量。

n2表示两个连续稀释倍数较高的测试卡数量。

d表示两个不同稀释倍数之间的较高稀释倍数。

例如:

          ∑C            232+224+33+35           544

N = —————— = ————————  = ———— = 24727

     (n₁+0.1n₂)d    (2+0.1×2)×10^-2         0.022

上述结果四舍五入后得到25000 (或 2.5×10⁴).

3.3如果每个稀释倍数的测试卡上，菌落数均大于300CFU时，计算最大稀释倍数测试卡上菌落数的平均值，再乘以最大稀释倍数。

3.4如果每个稀释倍数的测试卡上，菌落数小于30CFU，则计算最小稀释倍数测试卡上菌落数的平均值，再乘以最小稀释倍数。

3.5如果在所有稀释的样品(包括原液样品)的测试卡上均未发现菌落，则以小于1倍的最小稀释倍数报告测试结果。

3.6如果平均数量的细菌菌落的稀释倍数为30cfu - 300cfu,有些少于30cfu或有些超过300cfu，计算细菌菌落的平均数时取值最接近30cfu或300cfu，然后乘以相应的稀释倍数。

3.7菌落数量报告

3.7.1如果菌落数小于100，则按照四舍五入规则，使用两个有效数字以科学记号表示。

3.7.2如果菌落数量超过100(包括100)，则按照四舍五入规则将第三位数字四舍五入，使用科学计数法表示前两位数字。

3.7.3如果数据无法统计，向TNTC报告。

3.7.4空白对照测试卡上如有菌落生长，检测无效。

3.7.5固体样品以CFU/g为报告单位，液体样品以CFU/mL为报告单位。

4. 表面采样方法

将1mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水吸于测试卡上，静置10秒，使培养基凝固。揭开上膜，使测试卡的中心过滤部分与样品表面接触。然后用手按压，盖上薄膜，放入培养箱培养。

5. 补充说明

5.1菌落测试卡与传统计数方法检测结果的符合率均大于80%。

5.2磷酸盐缓冲液的制备及灭菌：

原液:称取34.0g磷酸二氢钾 (KH₂PO₄)，溶解于500mL纯水或蒸馏水中，然后用约175mL 1mol/L的氢氧化钠(NaOH)调节pH值至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后放入冰箱保存。

稀释剂：汲取1.25mL原液，用蒸馏水稀释至1000mL，用合适的容器分装。在121℃高压下蒸15分钟或放入消毒柜中。

5.3生理盐水配制及消毒:称取8.5 g氯化钠(NaCl)，用蒸馏水或纯水1000mL溶解。用合适的容器分装，在121℃高压下蒸15分钟或放入消毒柜中。

5.4使用过的测试卡上有活菌，按《生物安全废物处理规则》处理。